Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Выявление H.pylori в различных типах клинического материала

Читайте также:
  1. I. Историческая работа сообразно её материалам
  2. II. Закрепление и обобщение пройденного материала
  3. II. Игровые задания на повторение материала
  4. III. Закрепление материала.
  5. III. Изучение нового материала
  6. III. Изучение нового материала
  7. III. Изучение нового материала

Первой из решаемых нами задач стала оценка возможностей метода ПЦР при детекции H.pylori в различных субстратах (биоптатах слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, желудочном соке, фекалиях). Известно, что H.pylori колонизирует эпителий желудка и двенадцатиперстной кишки, поэтому традиционно для его выявления рекомендуется исследовать биоптат слизистых этих отделов. Однако отбор биоптатов — процедура инвазивная, требующая дорогостоящего оборудования и травмирующая пациента. Кроме того, по протоколу при проведении фиброгастроскопиии для последующего исследования на присутствие Н. pylori рекомендуется производить отбор материала не менее чем в 5 участках, что на практике зачастую не представляется возможным.

Наиболее информативным субстратом для выявления H.pylori методом ПЦР нам представлялся желудочный сок. По данным литературы обсемененность Н. pylori слизистых желудка и двенадцатиперстной кишки неравномерна [56], поэтому результат исследования в значительной степени зависит от правильности отбора материала. Желудочный сок является интегративным субстратом, омывающим весь желудок, поэтому даже при наличии небольших очагов колонизации H.pylori можно ожидать присутствие патогена в желудочном соке. Чувствительность метода ПЦР при выявлении хеликобактера в желудочном соке составляет 96% [375, 391], что свидетельствует о перспективности этого субстрата как объекта для выявление H.pylori.

Нами проведена оценка возможности использования желудочного сока, и фекалий как альтернативных биоптатату материалов для ПЦР-детекции Н. pylori. У 128 пациентов с гастродуоденальной патологией параллельно и одновременно анализировались образцы биоптатов слизистой желудка и пробы желудочного сока. Н. pylori выявлен в 93 пробах биоптатов (72,6±3,9%), и в 92 пробах желудочного сока (71,9±4,0%). Варианты полученных результатов представлены в таблице 13.

Таблица 13.

Выявление H.pylori в образцах биоптатов и желудочного сока методом ПЦР при параллельном исследовании.

Количество обследованных Варианты результатов ПЦР (в абс. значениях и %)
Биоптат Нр+ Жел.сок Нр+ Биоптат Нр+ Жел.сок Нр- Биоптат Нр- Жел.сок Нр+ Биоптат Нр- Жел.сок Нр-
        .26
100% 64,8±5,2 7,81±2,9 7,03±2,99 20,31 ±4,6
«Нр+» - H.pylori выявлен «Нр-» - Н. pylori не выявлен

 

В 109 случаях наблюдалось совпадение результатов выявления H.pylori методом ПЦР в каждом из субстратов, от одного больного, что составило 85,2±3,1% от общего числа обследованных.

Варианты несовпадений, когда один из субстратов был H.pylori- положительным, а другой отрицательным составили 14,8±3,1%. BIO случаях (7,8±2,4%) Н. pylori был выявлен в биоптате и не обнаружен в желудочном соке, в 9 (7,0±2,3%) при наличии в желудочном соке он не найден в биоптате. Можно предположить, что эти варианты получены в следствие неудачного отбора материала при фиброгастроскопии (биоптат взят из неколонизированного возбудителем участка) и низкой концентрацией H.pylori в желудочном соке.

Между показателями частоты выявления хеликобактера в желудочном соке и биоптатах, статистически достоверных различий не обнаружено (t <2,6). H. pylori обнаруживается в желудочном соке практически с той же эффективностью, что и в биоптате.

Полученные результаты позволили рекомендовать использование желудочного сока для проведения ПЦР обследования пациентов с различными типами гастродуоденальной патологии. Желудочный сок - менее «инвазивный» субстрат, при его исследовании не наблюдается неспецифического синтеза ДНК, что объясняется низкой концентрацией эукариотической ДНК в этом субстрате.

Наиболее доступным материалом для исследования на Н. pylori являются пробы фекалий. Для их отбора не требуется сложного оборудования и инвазивных манипуляций, что привлекательно для практических исследований. Нами проанализировано 40 проб копроматериала от больных с гастродуоденальной патологией. У этой группы пациентов параллельно анализировались пробы фекалий и биоптатов. H.pylori был выявлен в 33 (82,5±6,0%) пробах биоптатов слизистой и только в 12 (30,0±7,2%) образцах фекалий. Варианты результатов представлены в таблице 14.

Таблица 14.

Выявление H.pylori в образцах биоптатов и копроматериала методом ПЦР при параллельном исследовании

Количество обследованных Варианты результатов ПЦР (в абс. значениях и %)
Биоптат Нр+ Фекалии Нр+ Биоптат Нр+ Фекалии Нр- Биоптат Нр- Фекалии Нр+ Биоптат Нр- Фекалии Нр-
         
100% 27,5±7,0 55±7,8 2,5±2,4 15±5,6
«Нр+» - H.pylori выявлен «Нр-» - Н. pylori не выявлен

 

Таким образом, эффективность выявления Н.ру1оп в копроматериале составляет 35,3±8,3% от числа Н.ру1оп-положительных проб. Статистическая


обработка полученных результатов показала, что обнаружение H.pylori в биоптатах достоверно выше, чем в копроматериале (t = 5,5).

Столь малая эффективность выявления возбудителя в фекалиях объясняется низкой концентрацией H.pylori в этом субстрате и ингибированием ПЦР компонентами непереваренной пищи, в первую очередь, липополисахаридами [214].

К сожалению, в настоящее время простых и доступных методов концентрации H.pylori в фекалиях и удаления полисахаридов копроматериала при подготовке проб не имеется [214, 291]. В связи с этим, фекалии не могут быть рекомендованы в качестве информативного субстрата при ПЦР обследовании пациентов на H.pylori.


Дата добавления: 2015-07-20; просмотров: 111 | Нарушение авторских прав


Читайте в этой же книге: Диагностика хеликобактерной инфекции | Амплификации фрагментов генома энтеробактерий | Амплификация фрагментов генома H.pylori. | Выбор приборов для проведения ПЦР и фиксирования результатов. | Разработка ПЦР тест-системы для экспресс-детекции шигелл и энтероинвазивных эшерихий | Адаптация ПЦР тест-системы для выявления генов токсина и адгезинов V.holerae. | Выбор и адаптация ПЦР тест систем для выявления возбудителей вирусных гепатитов и НУГИ. | Изучение распространенности генов факторов патогенности бактериальных возбудителей ОКИ с использованием молекулярно- биологических методов | Использование ПЦР тест-систем для детекции бактерий родов Shigella и Salmonella в санитарно-эпидемиологической и клинической практике. | Изучение эффективности панели отечественных ПИР тест-систем для выявления наиболее значимых бактериальных возбудителей ОКИ в Нижегородском елюдях. |
<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Алгоритм использования метода ПНР в диагностике бактериальных ОКИ| Сравнительный анализ результатов детекции H.pylori. полученных традиционными и молекулярно-биологическими методами.

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.006 сек.)