Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Изучение эффективности панели отечественных ПИР тест-систем для выявления наиболее значимых бактериальных возбудителей ОКИ в Нижегородском регионе

Читайте также:
  1. III. Изучение нового материала
  2. III. Изучение нового материала
  3. III. Изучение нового материала
  4. III. Изучение нового материала
  5. III. Изучение нового материала.
  6. III. Изучение нового материала. Постановка цели урока
  7. III. Изучение нового материала. Постановка цели урока

С 2003 г. ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора был начат выпуск экспериментальных ПЦР тест-системы для детекции бактерий рода Campylobacter и Y.enterocolytica. Появление этих диагностикумов сделало возможным проведение комплексного ПЦР-исследования клинического материала одновременно на четыре наиболее значимых и распространенных бактериальных возбудителя ОКИ - бактерии родов Salmonella, Shigella, Campylobacter и Y.enterocolitica. Подобные исследования представляют значительный практический и научный интерес. В Российской Федерации в настоящее время по официальной информации Роспотребнадзора 80% диарейных заболеваний остаются этиологически нерасшифрованными. Использование современных ДНК-технологий позволит повысить эффективность этиологической диагностики ОКИ.

По данным отечественной литературы сальмонеллезы и шигеллезы занимают ведущее место в структуре бактериальных кишечных инфекций в России [65]. Информация о кампилобактериозах и иерсиниозах практически
отсутствует, что обусловлено недостаточностью лабораторной диагностики этих заболеваний. Это связано как с объективными причинами (с уменьшением финансирования диагностических исследований), так и с проблемами методического характера. Поскольку бактерии рода Campylobacter являются труднонокультивируемыми микроорганизмами, выявление их бактериологическим методом - процедура сложная, трудоемкая и дорогостоящая.

S.4

Нами были исследованы 153 пробы фекалий от детей больных ОКЗ в возрасте от 3 мес. до 14 лет - пациентов Деской клинической инфекционной больницы №8 Нижнего Новгорода. Все пробы параллельно и одновременно исследовались бактериологическим методом и ПЦР с применением экспериментальных тест-систем для выявления бактерий родов Shigella, Salmonella, Campylobacter и Yersinia enterocolytica. Микробиологический анализ проб осуществляли специалисты бактериологической лаборатории инфекционной больницы №8. К сожалению, в этой лаборатории имелась возможность определять только бактерии родов Shigella и Salmonella. Результаты исследования представлены на рисунках 9 и 10

■ Возбудитель не выявлен

■ Shigella

■ Salmonella

■ Campylobacter

■ Yersinia

Рис. 9. Выявление бактериальных возбудителей ОКИ методом ПЦР у детей (данные в %)

■ Возбудитель не выявлен

■ Shigella

■ Salmonella

Рис. 10. Выявление бактериальных возбудителей ОКИ бактериологическим методом у детей (данные в %).

Методом ПЦР инфекционные агенты были обнаружены в 57 образцах клинического материала, что составило 37,3±3,9% от общего количества проанализированных проб. Случаев инфицирования несколькими инфекционными агентами не отмечалось. Наиболее часто выявлялись бактерии родов Salmonella и Shigella: в 45 (29,4±3,7%) и в 7 (4,5±1,7%) случаев соответственно. Бактерии рода Campylobacter были выявлены в 3-х пробах (1,9±1,1%), Yersinia enterocolitica в 2-х пробах (1,3±0,9%)

1.3%

При микробиологическом исследовании этиологический фактор ОКИ был установлен у 24 пациентов, что составило 15,7±2,9%. В 22 пробах (14,4±2,8%) были выявлены сальмонеллы; в 2 (1,3±0,9%) - шигеллы. Эффективность ПЦР-детекции сальмонелл была в 2 раза выше, чем бактериологического анализа, для шигелл этот показатель был выше - 3,5 раза. За счет обнаружения Campylobacter и Yersinia enterocolitica методом ПЦР количество ОКИ с установленным этиологическим агентом увеличилось на 3,2%. Во всех образцах, давших положительный результат в бактериологическом анализе, с помощью ПЦР также был выявлен аналогичный инфекционный агент.

12,1%

Использование ПЦР позволило повысить эффективность этиологической расшифровки ОКИ на 21,6 % (с 15,7±2,9% до 37,3±3,9%). Показано, что выявление этиологического агента ОКИ методом ПНР в 2,4 раза статистически достоверно выше, чем бактериологическим методом (г =

4,44)

Аналогичные исследования проведены на базе Клинической инфекционной больницы № 9 Нижнего Новгорода. Были исследованы 58 образцов фекалий от взрослых пациентов с клиническим диагнозом «ОКЗ». Методом ПЦР выявлялись 4 инфекционных агента, в бактериологическом исследовании - только бактерии родов Salmonella и Shigella. Результы представлены на рисунках 11 и 12. Методом ПЦР инфекционные агенты выявлены у 27 человек (48,3±6,6%), сальмонеллы - у 17 (29,3±6,0%), шигеллы - у 7(12,1±4,3%), кампилобактер у 4 (6,9±3,3%), иерсинии - у 2 (3,4±2,3%). У двух пациентов обнаружены ассоциации возбудителей: кампилобактер-иерсиния и шигелла-сальмонелла-кампилобактер. Такие варианты бактериальных ассоциаций крайне редки.

■ Возбудитель не выявлен

■ Shigella

■ Salmonella

■ Campylobacter

■ Yersinia

Рис. 11. Выявление бактериальных возбудителей ОКИ методом ПЦР у взрослых (данные в %)

■ Возбудитель не выявлен

■ Shigella

■ Salmonella

Рис. 12. Выявление бактериальных возбудителей ОКИ у взрослых бактериологическим методом (данные в %)

При бактериологическом исследовании положительные результаты получены в 11 случаях (19,0±5,2%). Сальмонеллы выделены от 9 человек (15,5±4,8%), шигеллы - от 2 (3,4±2,3%). Ассоциации не обнаружены. Эффективность выявления этиологических агентов методом ПЦР была в 2,5 раза достоверно выше, чем бактерологическим методом (1 = 3,48). Шигеллы ПЦР выявлялись в 3,5 раза чаще; сальмонеллы - в 1,9 раза чаще, по сравнению с бактериологическим методом.

Частота выявления бактериальных возбудителей ОКИ у взрослых больных оказалась выше, чем у детей (48,3±6,6% и 37,3±3,9% соответственно). Как правило, взрослые болеют бактериальными ОКИ реже, чем дети. Очевидно, высокая частота выявления инфекционных агентов, наличие ассоциаций возбудителей ОКИ в группе взрослых больных объясняется особенностями обследованного контингента. Существенную часть его составили лица без определенного места жительства и социально неадаптированные люди.

3,4%

Проведенные исследования свидетельствуют о существенном превосходстве комплексной ПЦР-детекции бактериальных возбудителей ОКИ по сравнению с микробиологическим методом по основному
показателю - эффективности выявления возбудителей ОКИ (в 2,4 раза - в группе детей, в 2,5 — в группе взрослых).

Кроме этого, комплексная ПЦР-детекция бактерий родов Salmonella, Shigella, Campylobacter и Y.enterocolitica технологичнее бактериологического анализа. Все четыре ГПДР тест-системы разработаны во ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, что позволило проводить исследования в стандартных условиях: использовать единый метод обработки проб, общую схему приготовления рабочей реакционной смеси и постановки ПНР, и только две программы амплификации. За счет этого сокращена продолжительность исследования, упрощены манипуляции при проведении анализа и снижена его себестоимость.

Бактериологический анализ на бактерии родов Salmonella, Shigella, Campylobacter и Y.enterocolitica существенно сложнее и продолжительнее ПЦР. Унифицировать и стандартизировать условия проведения бактериологического анализа невозможно, поскольку только при работе с шигеллами и сальмонеллами используется сходный набор питательных сред. Условия культивирования и питательные потребности кампилобактеров и йерсиний существенно отличаются друг от друга и от аналогичных параметров шигелл и сальмонелл.

В настоящее время стоимость комплексного ПЦР-исследования одновременно на 4 инфекционных агента (Shigella, Salmonella, Campylobacter, Y.enterocolitica) на 15% ниже стоимости бактериологического исследования на Shigella и Salmonella.

Все это свидетельствует о перспективности использования комплексного ПЦР-исследования при проведении первичной индикации бактериальных возбудителей ОКИ. Метод ПЦР целесообразно использовать как при скрининговых обследованиях большого количества больных и контактных лиц, при групповой и вспышечной заболеваемости ОКИ, так и в клинической практике при исследованиях клинического материала от

одиночных пациентов, поступающих в инфекционные стационары при спорадической заболеваемости.


Дата добавления: 2015-07-20; просмотров: 189 | Нарушение авторских прав


Читайте в этой же книге: Сложности, возникающие при использовании ПНР в практической диагностике. | Диагностика хеликобактерной инфекции | Амплификации фрагментов генома энтеробактерий | Амплификация фрагментов генома H.pylori. | Выбор приборов для проведения ПЦР и фиксирования результатов. | Разработка ПЦР тест-системы для экспресс-детекции шигелл и энтероинвазивных эшерихий | Адаптация ПЦР тест-системы для выявления генов токсина и адгезинов V.holerae. | Выбор и адаптация ПЦР тест систем для выявления возбудителей вирусных гепатитов и НУГИ. | Изучение распространенности генов факторов патогенности бактериальных возбудителей ОКИ с использованием молекулярно- биологических методов | Выявление H.pylori в различных типах клинического материала |
<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Использование ПЦР тест-систем для детекции бактерий родов Shigella и Salmonella в санитарно-эпидемиологической и клинической практике.| Алгоритм использования метода ПНР в диагностике бактериальных ОКИ

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.01 сек.)