Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Определение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов

Читайте также:
  1. I. Определение состава общего имущества
  2. I.3.1. Определение номенклатуры и продолжительности выполнения видов (комплексов) работ
  3. II. Определение зависимости периода собственных колебаний пружинного маятника от массы груза
  4. III. Определение размера единовременной социальной выплаты
  5. III. Перепишите и переведите предложения, возьмите в скобки распространенное определение, подчеркни те основной член распространенного определения (Partizip I или II).
  6. IV. Определение массы груза, опломбирование транспортных средств и контейнеров
  7. J-интеграл. Физическая сущность.Определение показателя для вязких материалов.

1. Для получения нейтрофилов мышам вводят внутрибрюшинно 3-4 мл 2-3% раствора пептона и через 2 ч животных умерщвляют с помощью хлороформа. Их вскрывают в асептических условиях. Из брюшной полости с помощью шприца или пастеровской пипетки отсасывают жидкость, переносят ее в силиконизированные центрифужные пробирки.

2. После центрифугирования пробирок в течение 10 мин при 1000 об/мин осадок ресуспендируют в среде 199, подсчитывают число клеток в камере Горяева и доводят до концентрации 1-2х106/мл.

3. К клеткам добавляют равный объем бактерий (чаще всего Staphylococcus aureus, не содержащий белка А) или опсонизированного зимозана в соотношении 1:10 и инкубируют при 37 °С в течение 30 мин.

4. Бактерии предварительно должны быть опсонизированы мышиной сывороткой. Опсонизацию проводят в течение 10 мин при температуре 37 °С с последующим отмыванием.

 

5. После инкубации готовят мазок на предметном стекле, фиксируют его метанолом 20 мин и красят краской Романовского-Гимзы в течение 30-40 мин.

6. Учет результатов осуществляется микроскопически. В мазке при увеличении х90 с иммерсионной системой подсчитывают фагоцитарный индекс (процент фагоцитирующих нейтрофилов) и фагоцитарное число (количество поглощенных бактерии на 1 нейтрофил).

Для изучения фагоцитарной активности макрофагов на 3-4-е сутки после введения раствора пептона мышей умерщвляют (в соответствии с современными нормами биоэтики), вскрывают в асептических условиях и вводят внутрибрюшинно 5-8 мл среды 199, содержащей 10% сыворотки эмбриона коровы. После легкого массажа брюшной полости жидкость отсасывают. Полость можно промывать средой 199 несколько раз, объединяя в одну все полученные порции. Далее исследование ведется так же, как опыты с нейтрофилами (рис. 3.3, см. также цв. вклейку).

Рис. 3.3. Фагоцитоз зимозана макрофагом (конфокальная микроскопия и лазерная сканирующая конфокальная микроскопия): а - интактный макрофаг; б - макрофаг, захвативший зимозан (красный)


Дата добавления: 2015-08-13; просмотров: 104 | Нарушение авторских прав


Читайте в этой же книге: ИНБРЕДНЫЕ ЖИВОТНЫЕ | СИСТЕМУ | Слизистые секреты, сорбированные на пористые губки | Лабораторная работа 2-1 | АНАЛИТИЧЕСКАЯ И ПРЕПАРАТИВНАЯ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИЯ | Выделение клеток методом проточной цитометрии | ОЦЕНКА ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ | ОЦЕНКА КЛЕТОЧНОЙ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ | Связывание с тетрамерными структурами MHC класса I | Лабораторная работа 3-2 |
<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Комплементзависимая цитотоксичность| Метод оценки хемотаксиса нейтрофилов с использованием камеры Бойдена

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.006 сек.)